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看看這篇文章,學(xué)習(xí)下細(xì)胞培養(yǎng)板的操作步驟
更新時(shí)間:2023-01-15瀏覽:736次
細(xì)胞培養(yǎng)板在進(jìn)行細(xì)胞操作時(shí)同樣遵循嚴(yán)格無(wú)菌的原則,各項(xiàng)操作要保證規(guī)范、科學(xué),不對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)造成額外的影響。這其中最常見(jiàn)的問(wèn)題就是如何保證加樣后細(xì)胞的均勻和盡量減少換液對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的影響。
細(xì)胞培養(yǎng)板的操作步驟:
1、加樣品:將標(biāo)本稀釋液100ul(或2滴)加到包被板內(nèi)(預(yù)留陰陽(yáng)性及空白對(duì)照2-5孔),將待檢血清用PBS或生理鹽水按1:20稀釋后取10ul加入反應(yīng)孔內(nèi)。
2、加對(duì)照:加入陰性對(duì)照1-3孔,陽(yáng)性對(duì)照1孔,各100ul對(duì)照血清??瞻讓?duì)照1孔空置。
3、溫育:將反應(yīng)板震蕩使樣品混勻后,置37℃溫箱或水浴反應(yīng)20分鐘。
4、洗板:用蒸餾水將濃縮洗滌液15ml稀釋至300ml。(1)手洗:將反應(yīng)板孔內(nèi)容物傾出,將洗滌液注滿反應(yīng)孔,放置30秒鐘后用力甩去,如此重復(fù)5次后拍干。(2)機(jī)洗:5次,每孔注入洗滌液200ul或注滿,停留30秒鐘后吸盡拍干。
5、加酶標(biāo)工作液:每孔加入100ul(或2滴)酶標(biāo)工作液,置37℃溫箱反應(yīng)20分鐘后,洗板5次,洗板操作同步驟4。
6、顯色和終止反應(yīng):將底物A、B液各50ul(或1滴)加到反應(yīng)孔內(nèi),37℃避光顯色10分鐘。每孔加入終止液50ul(或1滴)混勻終止反應(yīng)。