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細(xì)胞凍存步驟： 

細(xì)胞復(fù)蘇步驟： 

常見注意事項(xiàng)： （廣州市超博科技有限公司）

有關(guān) DMSO 的一些注意事項(xiàng)：?? 

DMSO 能夠快速穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞中，降低冰點(diǎn)、延緩凍存過程，同時(shí)提高細(xì)胞內(nèi)的離子 濃度、減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成，從而減少細(xì)胞損傷程度。 

DMSO 在溶解過程中會(huì)放熱，應(yīng)先與培養(yǎng)基混勻后再加血清，同時(shí)凍存液需要提前配置， DMSO 現(xiàn)配對(duì)細(xì)胞的毒性可能更大； 

復(fù)蘇時(shí)，要離心去除 DMSO，并用新鮮的培養(yǎng)基洗滌 1-2 次，注意離心的時(shí)候速度不要太快； 

2.  血清需要比正常養(yǎng)細(xì)胞時(shí)多加，一般為 10%-20%。 

3.  解凍時(shí)，要盡快將凍存管整體溫度上升至 37 攝氏度，由于凍存管具有一定的厚度，故 而可以將水浴鍋的溫度調(diào)至 40 攝氏度左右，可以縮短解凍時(shí)間。 

4.  梯度凍存，即可以按照-4℃-->20℃~40℃-->80℃-->液氮的順序程序性降溫。 

知識(shí)點(diǎn)思維擴(kuò)散： 

  1972 年，冷凍損傷的兩因素假說：冰晶損傷和溶液損傷假說被 Mazur 等人首先提出，

他們是根據(jù)中國(guó)倉(cāng)鼠組織培養(yǎng)細(xì)胞的低溫保存實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析得到的。 

 冰晶損傷假說認(rèn)為隨著溫度的下降，細(xì)胞內(nèi)外的水分結(jié)冰，所形成的冰晶會(huì)造成細(xì)胞膜

和細(xì)胞器的破壞并引起細(xì)胞死亡。這種因細(xì)胞內(nèi)部結(jié)冰而致的細(xì)胞損傷即就是冰晶損傷

(Intracellular ice damage)。冰晶損傷是由冷卻速度過快造成，冷卻速度越快，冰晶損傷越大。 

 溶液損傷解說認(rèn)為隨著溫度的下降，細(xì)胞外部的水分會(huì)先結(jié)冰，從而使得未結(jié)冰的溶液

中電解質(zhì)濃度升高，細(xì)胞膜上的脂質(zhì)會(huì)因長(zhǎng)時(shí)問暴露在高溶質(zhì)的溶液中而受到損壞，細(xì)胞發(fā)

生滲漏，導(dǎo)致在復(fù)溫時(shí)大量水分滲入細(xì)胞內(nèi)造成細(xì)胞死亡。這種因保存溶液溶質(zhì)濃度增高而

致的細(xì)胞損傷被稱為溶液損傷(Solution damage)。溶液損傷是由冷卻速度過慢，使細(xì)胞在高

濃度的溶液中暴露的時(shí)間過長(zhǎng)而造成，冷卻速度越慢，此損傷越嚴(yán)重。 

  作者：老談