人胃癌細(xì)胞購(gòu)買細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1. 收到細(xì)胞后*先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書，SNU-1；人胃癌細(xì)胞了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需細(xì)胞因子等。

3. 用75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問(wèn)題貼壁細(xì)胞會(huì)有少量從瓶壁脫落，將細(xì)胞置于培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)過(guò)夜，隔天再取出觀察。此時(shí)多數(shù)細(xì)胞均會(huì)貼壁，若細(xì)胞仍不能貼壁請(qǐng)用臺(tái)盼藍(lán)染色測(cè)定細(xì)胞活力，如果證實(shí)細(xì)胞活力正常，請(qǐng)將細(xì)胞離心后用新鮮培養(yǎng)基再次貼壁培養(yǎng)；如果染色結(jié)果顯示細(xì)胞無(wú)活力，請(qǐng)拍下照片及時(shí)和我們聯(lián)系，信息確認(rèn)后我們?yōu)槟倜赓M(fèi)寄送一次。

4. 建議客戶收到細(xì)胞后前3天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于技術(shù)部溝通交流。"    P4

    包裝規(guī)格：    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）

    細(xì)胞規(guī)格：    1*10(5)/ml——1*10（6）/ml

    安全水平：    1

    細(xì)胞種屬：    人

    組織來(lái)源：    胃

    細(xì)胞形態(tài)：    上皮細(xì)胞樣

    細(xì)胞特性：    貼壁

    細(xì)胞融合度：    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）

    細(xì)胞檢測(cè)：    細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌

    "細(xì)胞培養(yǎng)三不要：

養(yǎng)科研細(xì)胞是生物醫(yī)學(xué)研究的基本功。有三個(gè)小經(jīng)驗(yàn)可以和大家分享一下：

1. 不要燒瓶口。大多數(shù)人都喜歡在酒精燈的火焰上關(guān)瓶子，覺(jué)得這樣可以避免污染。不知道大家是不是有培養(yǎng)基怎么越用越發(fā)紫的困惑？知道為什么嗎？燒瓶口燒的。培養(yǎng)基一般都是用碳酸/碳酸氫跟作緩沖體系。瓶口在火焰上的時(shí)候，熾熱的空氣進(jìn)入瓶?jī)?nèi)。塞緊塞子放入冰箱后，空氣變冷，壓力驟降，培養(yǎng)基中的碳酸就會(huì)轉(zhuǎn)化成二氧化碳，釋放出來(lái)。培養(yǎng)基中的碳酸少了，當(dāng)然會(huì)變堿。如果不燒瓶口的話，你會(huì)發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)液變堿的速度會(huì)大大減慢。（當(dāng)然多多少少還是會(huì)有一點(diǎn)越用越堿，因?yàn)槭覝剡€是比冰箱內(nèi)的溫度高）

其實(shí)燒瓶口防止污染純粹是心理安慰。不妨試一下把手指在火上晃幾下，你會(huì)發(fā)現(xiàn)根本就不會(huì)燒疼。如果有細(xì)菌的話，這么晃兩下也燒不死多少。要想燒死全部細(xì)菌，除非把瓶口和塞子燒紅。我在國(guó)內(nèi)從來(lái)就不燒瓶口。來(lái)美國(guó)以后發(fā)現(xiàn)這里更*，超凈臺(tái)內(nèi)根本就不點(diǎn)酒精燈。

2. 不要頻繁看細(xì)胞。對(duì)于初學(xué)者而言，養(yǎng)細(xì)胞就像養(yǎng)孩子一樣，有空就要去看看。細(xì)胞越是養(yǎng)不好，就越是經(jīng)常去看。實(shí)際上看細(xì)胞對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)沒(méi)有任何好處，SNU-1；人胃癌細(xì)胞特別是對(duì)原代細(xì)胞或是免疫磁珠分選后，密度特別低的細(xì)胞。培養(yǎng)基中的生長(zhǎng)因子是非常有限的。細(xì)胞好不容易自分泌一點(diǎn)兒促生長(zhǎng)的因子在其周圍，形成有利于生長(zhǎng)的局部環(huán)境。你跑去看細(xì)胞，培養(yǎng)瓶這么一晃，把因子都給晃散了。經(jīng)?？梢钥吹叫率忠惶斓酵矶荚诳醇?xì)胞，細(xì)胞老是長(zhǎng)不好。老手細(xì)胞一扔好幾天不管，細(xì)胞瘋長(zhǎng)。

3. 不要怕消化。在傳代的時(shí)候，初學(xué)者往往生怕細(xì)胞消化過(guò)度，早早地終止消化。細(xì)胞沒(méi)下來(lái)就使勁吹燈，吹得滿瓶子都是氣泡。在我看來(lái)，用力吹打?qū)?xì)胞的損傷比消化更大。我?guī)熜衷谧鲅芷交≡臅r(shí)候，37度消化過(guò)夜，細(xì)胞也沒(méi)事。我一般是等細(xì)胞*變圓后才中止消化。細(xì)胞輕輕一晃就能下來(lái)。還有，動(dòng)作要輕柔，盡量不要產(chǎn)生氣泡。氣泡在破裂時(shí)的機(jī)械應(yīng)力相當(dāng)大，對(duì)細(xì)胞的傷害也是很大的。"    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書

    傳代方法：    建議1:2-1:3 兩天換液一次

    凍存條件：    詳見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書

    主要文獻(xiàn)：    請(qǐng)具體查閱相關(guān)發(fā)表文章

細(xì)胞接收后的操作流程與注意事項(xiàng)：

1、如果細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，而收到時(shí)呈懸浮或者部分懸浮的狀態(tài)，請(qǐng)將懸浮的細(xì)胞即時(shí)離心，加15%血清的*培養(yǎng)基到新的培養(yǎng)皿/瓶繼續(xù)培養(yǎng)3天；同時(shí)原培養(yǎng)瓶中剩下的貼壁細(xì)胞更換為15%血清的*培養(yǎng)基培養(yǎng)3天。3天后若原瓶或者新瓶中的細(xì)胞都沒(méi)有出現(xiàn)增值而是繼續(xù)脫落死亡，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員會(huì)跟進(jìn)解決

2、貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢；適當(dāng)提高血清濃度（*高不能超過(guò)20%），或可根據(jù)該細(xì)胞生長(zhǎng)密度，考慮胰酶消化后，轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)瓶繼續(xù)培養(yǎng)

3、生長(zhǎng)不均：貼壁細(xì)胞若出現(xiàn)分布不均，成島狀生長(zhǎng)，可將細(xì)胞進(jìn)行消化，重懸打散細(xì)胞，加入新鮮培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)

細(xì)胞常規(guī)培養(yǎng)傳代流程（請(qǐng)嚴(yán)格遵照無(wú)菌操作）

1、吸出原培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，PBS緩沖液潤(rùn)洗細(xì)胞兩次，加2-3ml 0.25%胰酶進(jìn)行消化細(xì)胞（注意把握消化時(shí)間，通?？刂圃?-2min）

2、鏡下觀察消化情況，在細(xì)胞邊緣縮小，貼壁松動(dòng)時(shí)（不建議消化到細(xì)胞漂?。┤サ粢让?，加6-8ml*培養(yǎng)基，輕輕吹打細(xì)胞層，盡量把細(xì)胞層吹落，吹散

3、取部分細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移到新的培養(yǎng)皿/瓶中，添加適當(dāng)?shù)?培養(yǎng)基，把細(xì)胞懸液打勻，于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)

4、SNU-1；人胃癌細(xì)胞注意培養(yǎng)基PH值變化情況，定期換液（每周2-3次），待細(xì)胞密度達(dá)到80%以后重復(fù)1項(xiàng)操作或者凍存

特別注意：（如使用公共實(shí)驗(yàn)室或者初次接觸細(xì)胞培養(yǎng)，建議添加雙抗培養(yǎng)）人胃癌細(xì)胞