GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞詳細(xì)說明

細(xì)胞名稱 GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞

生長特性 貼壁生長

形態(tài)特性 上皮樣

產(chǎn)品規(guī)格 1×10^6 cells/瓶

培養(yǎng)條件 RPMI-1640+10%FBS+1%P/S

生長條件 氣相：5%CO2  95% 空氣   溫度：37 ℃

凍存條件 90%FBS+10%DMSO

背景資料 GBC-SD 細(xì)胞株是王展明等2000年從一位61歲的男性低分化膽囊癌患者中建立的。細(xì)胞的形狀有多邊形、紡錘形和正方形。 分泌CEA和CA19-9。倍增時(shí)間大約為21.4小時(shí)?？梢浦驳铰闶?，生成的腫瘤與原發(fā)腫瘤相似。

GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞常規(guī)說明：

凍存液成分：10%DMSO+40%FBS+50%基礎(chǔ)培養(yǎng)液

細(xì)胞質(zhì)檢情況：不含細(xì)菌、真菌、支原體等微生物污染

傳代建議：1:2~1:3傳代，2~3天換液1次

特別提醒：簽收細(xì)胞后，如細(xì)胞狀態(tài)不佳，或培養(yǎng)中遇到問題，煩請(qǐng)當(dāng)天盡快聯(lián)系，以便處理。當(dāng)天及時(shí)反饋細(xì)胞情況和細(xì)胞照片是售后跟蹤處理重要的參考依據(jù)，請(qǐng)務(wù)必重視。

一、 GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞復(fù)蘇

1. 把凍存管從液氮中取出來，立即投入37℃水浴鍋中，輕微搖動(dòng)。液體都融化后（大概1-1.5分鐘），拿出來噴點(diǎn)酒精放到超凈工作臺(tái)里。

2. 把上述細(xì)胞懸液吸到裝10ml培養(yǎng)基的15ml的離心管中（用培養(yǎng)基把凍存管洗一遍，把粘在壁上的細(xì)胞都洗下來），1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

3. 把上清液倒掉，加1ml培養(yǎng)基把細(xì)胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養(yǎng)基的10cm培養(yǎng)皿中前后左右輕輕搖動(dòng)，使培養(yǎng)皿中的細(xì)胞均勻分布。

4. 標(biāo)好細(xì)胞種類和日期、培養(yǎng)人名字等，放到CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，細(xì)胞貼壁后換培養(yǎng)基。

5. 3天換一次培養(yǎng)基。

二、 GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞傳代

1. 培養(yǎng)皿中的細(xì)胞覆蓋率達(dá)到80%-90%時(shí)要傳代。

2. 把原有培養(yǎng)基吸掉。

3. 加適當(dāng)?shù)囊鹊鞍酌福芨采w細(xì)胞就行），消化1-2分鐘。

4. 細(xì)胞都變圓后加如入等體積的含血清的培養(yǎng)基終止消化。

5. 用移液槍吹打細(xì)胞，把細(xì)胞都懸浮起來。

6. 把細(xì)胞吸到15ml的離心管中，1000轉(zhuǎn)離心5分鐘。

7. 倒掉上清液，加1-2ml培養(yǎng)基，把細(xì)胞都吹起來。

8. 根據(jù)細(xì)胞種類把細(xì)胞傳到幾個(gè)培養(yǎng)皿中。一般，癌細(xì)胞分5個(gè)，正常細(xì)胞傳3個(gè)。繼續(xù)培養(yǎng)。

三、 GBC-SD(GBCSD)；人膽囊癌細(xì)胞凍存

把細(xì)胞消化下來并離心（同上）。用配好的凍存液把細(xì)胞懸浮起來，分裝到滅菌的凍存管中，靜止幾分鐘，寫明細(xì)胞種類，凍存日期。4℃ 30min，-20℃ 30min，-80℃過夜，然后放到液氮灌中保存。

凍存液的配制： 70%的*培養(yǎng)基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加，邊滴邊搖。

要注意的就是無菌操作！