人咽鱗癌細(xì)胞

1、您收到FaDu人咽鱗癌細(xì)胞后，請(qǐng)按照以下方法進(jìn)行操作：

取出25cm²培養(yǎng)瓶，75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶，拆下封口膜，放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)，然后換用新鮮*培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進(jìn)行傳代。

2、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用12ml*培養(yǎng)基重懸，然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代，*后放入37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）待細(xì)胞*貼壁后，觀察培養(yǎng)結(jié)果，之后進(jìn)行換液培養(yǎng)或傳代。

3、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄25cm²培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2）添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入*培養(yǎng)液終止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長(zhǎng)期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 

4、細(xì)胞復(fù)蘇：
1）從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意：佩戴防爆管面具），快速將其置入37℃水浴中解凍，直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；
2）將凍存管中的細(xì)胞移至含5ml*培養(yǎng)基的15ml離心管中， 1000rpm離心5min；

3）棄上清，沉淀用5ml*培養(yǎng)基重懸，接種25cm²培養(yǎng)瓶，于37℃，5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4）第二天，換用新鮮*培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

 本公司細(xì)胞引種來(lái)源：ATCC、DSMZ、ECACC、武大細(xì)胞庫(kù)、上海生化細(xì)胞所、中國(guó)科學(xué)院典型培養(yǎng)物保藏委員會(huì)等

人咽鱗癌細(xì)胞細(xì)胞處理方法：

一、貼壁細(xì)胞

1、 接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。

3、嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4、37度平衡1-2小時(shí)。

5、用移液管吸取培養(yǎng)基，到50ml離心管中，剩下細(xì)胞密度達(dá)到80%至90%可以傳代，如沒有達(dá)到添加6ml新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

6、如果肉眼檢查上清有細(xì)胞，對(duì)50ml上清進(jìn)行離心收集細(xì)胞，如果細(xì)胞連片狀態(tài)，棄掉上清對(duì)收集的細(xì)胞進(jìn)行胰酶消化（1ml胰酶37度），接種培養(yǎng)。

二、懸浮細(xì)胞

1、接收到細(xì)胞，肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞 100X,200X 各一張）。

2、用 75%的酒精消毒外包裝,在超凈工作臺(tái)內(nèi)打開外包裝。

3、嚴(yán)格遵循無(wú)菌操作規(guī)范，打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。

4、細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴(yán)禁直接傾倒）。

5、1000rpm，5min 離心，用吸管小心吸出上清，加入培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞。

6、將重懸好的細(xì)胞轉(zhuǎn)入六孔板或者細(xì)胞培養(yǎng)瓶種，加入新鮮培養(yǎng)基，置于 37℃，5%CO2 培養(yǎng)（大部分細(xì)胞）。

培養(yǎng)操作：細(xì)胞培養(yǎng)操作指南

細(xì)胞常見問題分析：細(xì)胞培養(yǎng)常見問題分析

細(xì)胞在發(fā)貨前進(jìn)行質(zhì)檢：

1、細(xì)胞存種的活性檢測(cè)

2、細(xì)菌、真菌、霉菌污染物鏡檢

3、衣原體、支原體檢測(cè)（熒光法、培養(yǎng)法等）

產(chǎn)品質(zhì)量保證及售后：

1、 細(xì)胞為三代以內(nèi)，活體。運(yùn)輸過程中細(xì)胞出現(xiàn)污染和狀態(tài)不好，我們*免費(fèi)重新發(fā)貨。

2、 實(shí)驗(yàn)過程中若確定是客戶問題，客戶僅需支付物流和耗材費(fèi)用，我們可重新發(fā)貨。其他根據(jù)情況靈活處理。

3、 產(chǎn)品使用過程中，可提供技術(shù)上的指導(dǎo)。