人皮膚鱗癌細胞運輸和保存：

人皮膚鱗癌細胞；A-431 [A431]說明書視天氣狀況和運輸距離遠近，公司與客戶協(xié)商后選擇下述方式中的一種進行。

1)1mL凍存細胞懸液裝于1.8ml的凍存管中，置于裝滿干冰的泡沫保溫盒中進行運輸；收到細胞后請盡快解凍復蘇細胞進行培養(yǎng)，如無法立刻進行復蘇操作，凍存細胞可在-80℃的條件下保存1個月。

2)T-25培養(yǎng)瓶充滿*培養(yǎng)基后進行常溫運輸；收到細胞后請鏡下觀察細胞生長狀態(tài)，如鋪瓶率超過85%請立即進行傳代操作，如懸浮的細胞較多，請將培養(yǎng)瓶至于培養(yǎng)箱中靜置過夜以幫助未死亡的懸浮細胞能夠再次貼壁。

可以重發(fā)的情況有哪些？

（1）人皮膚鱗癌細胞；A-431 [A431]說明書細胞運輸途中遭遇的各種問題，細胞丟失、破損、漏液等，重發(fā)；

（2）凍存的細胞復蘇后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；

（3）存活的細胞靜置24小時后，絕大多數細胞未存活，重發(fā)；

（4）凍存的細胞復蘇后或存活的細胞靜置4小時后并且未開封，出現(xiàn)污染，重發(fā)；

（5）視具體情況而定。

出現(xiàn)問題，不予以重發(fā)的情況有哪些？

（1）人皮膚鱗癌細胞；A-431 [A431]說明書客戶造成細胞污染，不重發(fā)；

（2）客戶不正確操作致細胞狀態(tài)不好，不重發(fā)；

（3）細胞狀態(tài)不好，未細胞培養(yǎng)前3天照片的，不重發(fā)；

（4）細胞培養(yǎng)時經其它處理的，不重發(fā)；

（5）細胞收到2天內，未告知，不重發(fā)；

人皮膚鱗癌細胞細胞特性：

1)】人皮膚鱗癌細胞；A-431 [A431]說明書組織來源于實驗動物的正常眼組織。

2)細胞鑒定：細胞角蛋白-18(CK-18)免疫熒光染色為陽性。

3)經鑒定細胞純度高于90%。

4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌。

5)細胞生長方式：上皮樣，不規(guī)則細胞，貼壁培養(yǎng)。

注意事項：

（1）凍存前細胞狀態(tài)，細胞zui好在對數生長期，細胞密度適合，剛剛發(fā)生細胞融合，過密或連成片的細胞狀態(tài)不好，而且消化時不容易分散；

（2）凍存的密度不宜過低，10的6次方-7次方的數量級比較好，我凍存的細胞一般T25培養(yǎng)瓶（5*107），一瓶凍一管（1.5ml凍存管），10cm培養(yǎng)皿（大概10的8次方個細胞）分成兩管。

（3）消化和吹打，切忌胰酶消化過度，吹打不可太用力，zui好不要吹出好多泡泡。消化后立即加入*培養(yǎng)基吹打哦，不是加入凍存液再吹打。

（4）離心后加入凍存液。凍存液中FBS的用量對于腫瘤細胞株而言要求不是很嚴格，我從10%-90%都用過，問題不大，個人認為10%-20%可以了，能節(jié)約處就節(jié)約點嘛！另外，凍存液可以在處理細胞前配置，放在4度冰箱預冷。細胞離心后直接用預冷的凍存液重懸，移入凍存管。

（5）關于“慢凍”，傳統(tǒng)的方法，LLC細胞凍存管用棉花包好，4度2h，-20度2h或更長，-80度過夜，zui后液氮。對于條件較好的實驗室和細胞凍存數量多的實驗室，推薦使用程序降溫盒，內裝異丙醇，在-80度并內可以逐漸降溫，很方便，省了包棉花、4度、-20度了。