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Q1. 人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?
要冷藏??!因?yàn)橐后w培養(yǎng)基經(jīng)冷凍后再經(jīng)溶化時,其溶液的pH值會發(fā)生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細(xì)胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。
Q2.人腦星形膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞 液體培養(yǎng)基中谷氨酰胺的作用,及使用方法。
幾乎所有的細(xì)胞對谷氨酰胺有較高的要求,細(xì)胞需要谷氨酰胺合成蛋白質(zhì),在缺少谷氨酰胺時,細(xì)胞生長不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定,應(yīng)置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有谷氨酰胺的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺?;A(chǔ)醫(yī)學(xué)細(xì)胞中心在其服務(wù)項(xiàng)目中配制分裝了高濃度(100倍)的谷氨酰胺溶液(1ml/支)。每支1ml的谷氨酰胺加到99ml*培養(yǎng)基中,其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色,-24?C保存。
Q3.細(xì)胞計(jì)數(shù)及存活測試
1、原理:
(1)計(jì)算細(xì)胞數(shù)目可用血球計(jì)數(shù)盤或是Coultercounter粒子計(jì)數(shù)器自動計(jì)數(shù)。
(2)血球計(jì)數(shù)盤一般有二個chambers,每個chamber中細(xì)刻9個1mm2大正方形,其中4個角落之正方形再細(xì)刻16個小格,深度均為0.1mm。當(dāng)chamber上方蓋上蓋玻片后,每個大正方形之體積為1mm2×0.1mm=1.0x10-4ml。使用時,計(jì)數(shù)每個大正方形內(nèi)之細(xì)胞數(shù)目,乘以稀釋倍數(shù),再乘以104,即為每ml中之細(xì)胞數(shù)目。
(3)存活測試之步驟為dyeexclusion,利用染料會滲入死細(xì)胞中而呈色,而活細(xì)胞因細(xì)胞膜完整,染料無法滲入而不會呈色。一般使用藍(lán)色之trypan blue染料,如果細(xì)胞不易吸收trypan blue,則用紅色之Erythrosin bluish。計(jì)算細(xì)胞活率:活細(xì)胞數(shù)/(活細(xì)胞數(shù)+死細(xì)胞數(shù))×100%。計(jì)數(shù)應(yīng)在臺盼蘭染色后數(shù)分鐘內(nèi)完成,隨時間延長,部分活細(xì)胞也開始攝取染料;因?yàn)榕_盼蘭對蛋白質(zhì)有很強(qiáng)的親和力,用不含血清的稀釋液,可以使染色計(jì)數(shù)更為準(zhǔn)確。
上一產(chǎn)品:SW480人結(jié)腸癌細(xì)胞
下一產(chǎn)品:ZR-75-1人乳腺癌細(xì)胞
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