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LoVo(人結(jié)腸癌細(xì)胞)保種心得:
首先,細(xì)胞采購的運(yùn)輸形式一般分為兩種,一種是直接寄送凍存細(xì)胞,一種是復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞。前者是由液氮中取出細(xì)胞凍存管,采用干冰運(yùn)輸;后者是將細(xì)胞復(fù)蘇至T-25培養(yǎng)瓶中,采用常溫運(yùn)輸。兩者各有優(yōu)缺點(diǎn),第1種方式的優(yōu)點(diǎn)是可以長途運(yùn)輸,因?yàn)榧?xì)胞在干冰中相對穩(wěn)定,一般可以保證數(shù)周之內(nèi)不影響細(xì)胞活性,但缺點(diǎn)是運(yùn)輸成本高,且細(xì)胞復(fù)蘇是很復(fù)雜的過程,如果細(xì)胞復(fù)蘇后狀態(tài)不佳,則很難界定是來源的問題還是復(fù)蘇操作的問題;而第二種方式的優(yōu)點(diǎn)是細(xì)胞收到后可以直接通過觀察來大體了解細(xì)胞狀態(tài),并且對運(yùn)輸?shù)囊笙鄬^低,缺點(diǎn)則是只適合短途運(yùn)輸,因?yàn)榧幢氵\(yùn)輸時(shí)培養(yǎng)基中不添加血清,細(xì)胞還是會不斷增殖,當(dāng)細(xì)胞長滿后,細(xì)胞的狀態(tài)會隨時(shí)間的增加而不斷變差。綜上,如果是從國外大型細(xì)胞庫采購,一般采用第1種方法,既能適應(yīng)長途運(yùn)輸,且大型細(xì)胞庫的凍存細(xì)胞質(zhì)量普遍較hao,在良hao的操作下復(fù)蘇成活率很高;如果是從國內(nèi)細(xì)胞庫采購,則一般采用第二種方法,方便收到細(xì)胞時(shí)能較hao掌握細(xì)胞狀態(tài),并且降低運(yùn)輸成本。
LoVo(人結(jié)腸癌細(xì)胞)分別針對兩種運(yùn)輸方式來談下對新細(xì)胞的處理過程:
對于直接寄送凍存細(xì)胞的情況,首先要檢查的就是細(xì)胞收到后是否有足量剩余干冰,如果干冰不足,或是已經(jīng)沒有干冰,則細(xì)胞狀態(tài)可能會收到影響,建議盡快復(fù)蘇;如果有足量干冰,建議先轉(zhuǎn)移至-80℃冰箱過夜,于第二天按正常流程復(fù)蘇,即37℃水浴鍋中快速融解,低速離心后去除含DMSO的凍存液,換入適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基,輕柔吹勻后轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)皿中,補(bǔ)足培養(yǎng)基;一般貼壁細(xì)胞在24h內(nèi)即可觀察到細(xì)胞貼壁,從而判斷細(xì)胞狀態(tài),懸浮細(xì)胞則復(fù)蘇后即可觀察細(xì)胞狀態(tài)。對于凍存時(shí)間較長的細(xì)胞,可能需要傳代1到2次后,細(xì)胞才會調(diào)整到正常狀態(tài),所以細(xì)胞復(fù)蘇后如果狀態(tài)不佳,不要灰心,仍要細(xì)心培養(yǎng)。
對于復(fù)蘇后寄送活細(xì)胞的情況,則細(xì)胞收到后要先檢查細(xì)胞瓶是否有破損,細(xì)胞瓶在運(yùn)輸中很有可能受到碰撞和擠壓,導(dǎo)致瓶體受損。如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞瓶受損,則需要盡快處理,該棄就棄。如果細(xì)胞瓶完hao,則用酒精消毒瓶身,去除封口膜,然后置于37℃培養(yǎng)箱中靜置1-2h。待細(xì)胞穩(wěn)定后,觀察細(xì)胞狀態(tài),并及時(shí)記錄,因?yàn)楹芏鄧鴥?nèi)細(xì)胞庫都是可以反饋細(xì)胞狀態(tài)的,如果收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)不佳甚至污染,是可以要求重新寄送的。細(xì)胞如沒有異常,則盡快傳代并更換適合細(xì)胞的新鮮培養(yǎng)基。由于新細(xì)胞一般都是第1次接觸,細(xì)胞傳代過程中尤為需要注意胰酶消化時(shí)間,消化時(shí)間過短或過長都會影響細(xì)胞狀態(tài),甚至導(dǎo)致細(xì)胞死亡。我建議大家采用低濃度胰酶消化,消化時(shí)縮短放培養(yǎng)箱和觀察的間隔時(shí)間,以便盡可能找到合適的消化時(shí)間。
上一產(chǎn)品:L02(HL7702)(QSG-7701)人正常肝細(xì)胞
下一產(chǎn)品:MCF-10A人正常乳腺上皮細(xì)胞
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