RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)

更高效的兩步法RT-qPCR預(yù)混液（去基因組）

簡便快捷的操作：5 × HiScript^®III qRT SuperMix包含逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有組分，只需加入模板 RNA，20 min內(nèi)即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)

廣泛的模板兼容性：可兼容不同物種，完整度較差的 RNA 模板

*的雜質(zhì)耐受度：對(duì)于逆轉(zhuǎn)錄常見雜質(zhì)如乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸等，具有*的耐受度

的逆轉(zhuǎn)錄效率：與常見市售逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品相比，HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) 逆轉(zhuǎn)得到的cDNA定量C_T值小，具有的逆轉(zhuǎn)錄效率

1.簡便快捷的操作

HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)（Vazyme #R323）包含基因組清除模塊，可*去除 RNA 模板中殘留的基因組 DNA；同時(shí)Vazyme #R323 包含逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需的所有組分，只需加入模板 RNA，20 min 內(nèi)即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，操作簡便快捷。

2.廣泛的模板兼容性

分別以 HeLa 細(xì)胞、小鼠肝臟、擬南芥葉片的完整 RNA 與降解 RNA 為模板，使用 HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme#R323）以及市售常見品牌逆轉(zhuǎn)錄試劑 (Supplier T) 進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。將得到的 cDNA 進(jìn)行多個(gè)基因的 qPCR 定量分析，以不同基因?yàn)闄M坐標(biāo)，擴(kuò)增 C_T 值為縱坐標(biāo)繪圖，比較不同產(chǎn)品的逆轉(zhuǎn)錄效率。從圖中可以看出，以 HeLa 細(xì)胞、小鼠肝臟、擬南芥葉片完整 RNA 以及降解 RNA 為模板進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄定量，Vazyme #R323的擴(kuò)增C_T 值小于或等于T公司相關(guān)產(chǎn)品，說明Vazyme #R323逆轉(zhuǎn)不同物種RNA、完整度較差的RNA模板皆具有的逆轉(zhuǎn)錄效率。

3. *的雜質(zhì)耐受度

在RNA的提取過程中常常因操作或樣本的特殊性導(dǎo)致RNA中混有有機(jī)試劑或雜質(zhì)，這些物質(zhì)的殘留會(huì)嚴(yán)重影響逆轉(zhuǎn)錄效率。乙醇、異丙醇、水平衡酚、異硫氰酸胍、腐殖酸是 RNA 提取過程中較為常見的雜質(zhì)，測試其對(duì)逆轉(zhuǎn)錄效率的影響。

分別對(duì)上述 5 種雜質(zhì)設(shè)置 3 個(gè)不同濃度梯度，添加至 HiScript ^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 逆轉(zhuǎn)錄體系中，將得到的 cDNA 進(jìn)行 qPCR 檢測。以不同濃度雜質(zhì)為橫坐標(biāo)，△C_T  (△C_T = 含雜質(zhì)逆轉(zhuǎn)錄 cDNA 擴(kuò)增 C_T 值 – 未含雜質(zhì)逆轉(zhuǎn)錄 cDNA 擴(kuò)增 C_T 值 ) 為縱坐標(biāo)繪圖。從圖中可以看出，△C_T 均小于 0.15，說明 Vazyme #R323 對(duì)上述 5 種常見雜質(zhì)具有*的耐受度。

4. 的逆轉(zhuǎn)錄效率

以 100 ng HeLa RNA 為模板，使用 HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper) (Vazyme #R323) 以及市售其他逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品 ( 分別來自Supplier Ta、Th1、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti)，按照各自說明書推薦程序進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)。將得到的 cDNA 進(jìn)行多個(gè)基因的 qPCR 定量分析。以不同公司產(chǎn)品為橫坐標(biāo)，△C_T (△C_T = Vazyme #R323 cDNA 擴(kuò)增 C_T 值 – 各公司逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品 cDNA 擴(kuò)增 C_T 值 ) 為縱坐標(biāo)繪圖。從圖中可以看出，除一些體系Th1 △C_T ＞0 外，其余公司逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品均△C_T ＜0，說明 Vazyme #R323 逆轉(zhuǎn)錄效率優(yōu)于 Ta、Th2、N、P、R、B、Tr、Ti 相關(guān)逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品。

HiScript^® III RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)為HiScript^® II二代產(chǎn)品的升級(jí)產(chǎn)品，包含全新升級(jí)三代逆轉(zhuǎn)錄酶 HiScript^® III Reverse Transcriptase與針對(duì)逆轉(zhuǎn)錄特殊優(yōu)化的適 Buffer，進(jìn)一步提高了cDNA合成效率。本產(chǎn)品包含基因組清除模塊，可*去除 RNA 模板中殘留的基因組 DNA，確保后續(xù)定量結(jié)果更加真實(shí)可靠。與此同時(shí)，本產(chǎn)品將所有逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)所需組分融于一管，只需加入模板 RNA，20 min 內(nèi)即可完成逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，同時(shí)終止gDNA wiper作用，保證cDNA的完整性，并減少操作步驟，有效防止在操作過程中帶來的污染。

a. 包含Buffer、dNTP、HiScript^®III Reverse Transcriptase、RNase inhibitor、Random primers/Oligo (dT)₂₀VN primer mix。

b. 除不含HiScript^®III Reverse Transcriptase外，其余成分與5 × HiScript^®III qRT SuperMix 相同，用于配制No RT對(duì)照反應(yīng)。

- 30℃~- 15℃保存。

RT SuperMix for qPCR (+gDNA wiper)