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　　PCR熒光定量的原理：
 

　　以探針法PCR熒光定量為例：PCR擴(kuò)增時在加入一對引物的同時加入一個特異性的熒光探針，該探針兩端分別標(biāo)記一個報告熒光基團(tuán)和一個淬滅熒光基團(tuán)。開始時，探針完整地結(jié)合在DNA任意一條單鏈上，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收，檢測不到熒光信號；PCR擴(kuò)增時，Taq酶將探針酶切降解，使報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)分離，從而熒光監(jiān)測系統(tǒng)可接收到熒光信號，即每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子形成，實現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成*同步。
 

　　傳統(tǒng)的PCR進(jìn)行檢測時，擴(kuò)增反應(yīng)后需要進(jìn)行染色處理及電泳分離，并且只能作定性分析，不能準(zhǔn)確定量，易造成污染出現(xiàn)假陽性，使其應(yīng)用受到限制。實時定量PCR技術(shù)不僅實現(xiàn)了對模板的定量，且具有靈敏度高、特異性和可靠性更好、自動化程度高和無污染的特點，使得熒光定量PCR逐漸取代常規(guī)PCR。
 

　　在PCR擴(kuò)增反應(yīng)的最初數(shù)個循環(huán)里，熒光信號變化不大，接近一條直線，這樣的直線即是基線，這條線是可以自動生成也可以手動設(shè)置的。之后反應(yīng)會進(jìn)入指數(shù)增長期，這個期間擴(kuò)增曲線具有高度重復(fù)性，在該期間，可設(shè)定一條熒光閾值線，它可以設(shè)定在熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段任意位置上。
 

　　PCR熒光定量是具有劃時代意義的技術(shù)，具有操作簡單、快速方便、靈敏度高、重復(fù)性好、污染率低等優(yōu)點，不僅應(yīng)用于基因表達(dá)解析，還廣泛應(yīng)用于SNP分型解析、物種鑒定、病毒和病原菌的檢測、轉(zhuǎn)基因食品的定量分析、導(dǎo)入基因拷貝數(shù)的解析等諸多領(lǐng)域。